产品货号:
HR0061
中文名称:
昆虫组织蛋白提取试剂盒
英文名称:
Insect protein extraction kit
产品规格:
50T|100T
发货周期:
1~3天
产品价格:
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本试剂盒适用于从各种昆虫类细胞、组织中提取总蛋白。提取过程简单方便,可在1小时内完成。该试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物,阻止了蛋白酶对蛋白的降解,为提取高纯度的蛋白提供了保证。提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫共沉淀等下游蛋白研究。
- 使用方便,从昆虫类细胞,组织中提取蛋白不需经过研磨、反复冻融、超声破碎等前处理。
- 将蛋白提取的时间缩短至30分钟~1小时。
- 含蛋白稳定剂,提取的蛋白稳定。
- 紫外检测蛋白浓度时,背景干扰低。
- 蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解,蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含7种独立的蛋白酶抑制剂;每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性,包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
组分 | 50T | 100T |
昆虫蛋白提取液 | 25mL | 50mL |
蛋白稳定剂 | 200μL | 400μL |
蛋白酶抑制剂混合物 | 100μL | 200μL |
保存:蛋白酶抑制剂-20℃保存,蛋白稳定剂、蛋白提取液2~8℃保存,有效期1年。
移液器、离心机、涡旋振荡器
- 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。
- 实验过程中的所有试剂须预冷;所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
- 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀,不影响使用,溶解后正常使用。
- 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
- Western实验内参可以选用beta-actin、GAPDH、Tubulin。
- 提取液制备:每500μL冷的昆虫蛋白提取液中加入2μL蛋白酶抑制剂混合物,4μL蛋白稳定剂,混匀后置冰上备用。
- 取100mg昆虫组织样本剪碎,加入昆虫蛋白提取液。
注:用液氮研磨的方法更佳。 - 用匀浆机/匀浆器充分匀浆。也可用液氮研磨后加入蛋白提取液。
- 将匀浆在4℃条件下振荡15~20分钟。
注:
● 较低转速保持提取液在晃动即可。
● 没有振荡条件也可以不振荡,保持静置,稍微延长静置时间,中间每隔几分钟用吸头吹打混匀。 - 在4℃,12000×g条件下离心10分钟。
- 在上清吸入另一预冷的干净离心管,即可得到昆虫总蛋白。
- 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
注:
● 建议用BCA法进行蛋白定量。
● 蛋白样品-80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉,不要被细菌污染。
- 蛋白浓度低?
处理部分组织样本时可能没有裂解完全,导致蛋白浓度低。只要适当延长提取液的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理,没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。 - 用什么方法定量蛋白?
建议用BCA法。不适合用Bradford法,因为提取液中含有干扰Bradford法的组份,导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系,则可以用Bradford法定量。 - 提取时出现胶装沉淀?
蛋白提取液处理产物中有时会出现少量透明胶状物,属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。不检测和基因组DNA结合特别紧密的特定蛋白的情况下,可以直接离心取上清进行后续实验即可;如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白,则可以通过超声处理,300w/10秒间隔10秒,超声3分钟,随后离心取上清用于后续实验。检测一些常见的转录因子,例如NF-kappaB、p53等时,不必进行超声处理。 - 提取的蛋白具有活性吗?
本试剂盒不含有离子型去垢剂组份,不破坏蛋白的结构,没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏,蛋白均保持其天然构象和活性。
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